Лабораторная диагностика кампилобактериозов
В зависимости от формы кампилобактериоза и локализации патологического процесса материалом для изучения помогают кровь, спинномозговая жидкость, фекалии, рвотные массы и т.д. Кампилобактеры не хорошо переносят транспортировку. Для транспортировки забранных образцов в бактериологическую лабораторию применяют транспортную питательную среду Cary-Blair, среду для контроля стерильности с рН 8,5 либо щелочную пептонную воду.
Этап
Из доставленного материала готовят мазки на предметных стеклах и окрашивают их по Граму. При наличии в пробе кампилобактеров в мазке выявляют грамотрицательные узкие, спирально изогнутые палочки S- и С-образной формы длиной 0,5-8,0 мкм, каковые довольно часто соединяются в маленькие цепочки в виде крыльев летящей чайки. Для ускоренной ориентировочной диагностики кишечного кампилобактериоза узкий мазок фекалий фиксируют над пламенем, в течение 10-20 с. окрашивают водным раствором главного фуксина и промывают водой. За таковой маленький временной отрезок большинство находящейся в мазке сопутствующей микрофлоры прокраситься не успевает, тогда как кампилобактеры возможно легко выяснить по характерной морфологии.
Кампилобактеры растут при концентрации кислорода в газовой среде от 5 до 17%. Посев исследуемого материала создают на плотную питательную среду, приготовленную на базе эритрит-агара, в которую по окончании охлаждения до 45-50°С додают 5% гемолизированной крови барана и реагенты для увеличения аэротолерантности микроорганизмов (пируват натрия, сульфат железа и метабисульфит натрия).
Для освобождения от сопутствующей микрофлоры применяют два метода. Первый метод содержится в добавлении к питательной среде смеси антимикробных препаратов (полимиксин, рифамапицин, амфотерицин В, ристомнцин и фузидин), разрешающих выделять возбудитель из ассоциации микроорганизмов. Второй метод основан на способности кампилобактеров проходить через фильтры с диаметром пор 0,5-0,6 мкм, тогда как большая часть представителей сопутствующей флоры при фильтровании задерживается. Стерильные мембранные фильтры помещают на поверхность шоколадного либо кровяного агара и наносят на них пара капель 10% суспензии исследуемого материала. Через 30 мин фильтры убирают, чашки с посевами помещают в анаэростат либо эксикатор и культивируют при температуре 42°С.
Для микроаэрофильных условий культивирования применяют газовую среду следующего состава: 5% кислорода, 10% азота и двуокиси 85% углерода. При отсутствии оптимальной газовой смеси применяют сосуд со свечой. Во многих случаях возможно применять газогенерирующие пакеты, принцип действия которых основан на каталитическом поглощении кислорода в замкнутом пространстве (анаэростате и др.) до генерации 5-7% и концентрации двуокиси углерода химическим методом.
2 этап
Спустя 2-4 сут. инкубации, на плотных питательных средах вырастают колонии двух типов. На свежеприготовленных питательных средах вырастают колонии плоские, мокрые, блестящие, с тенденцией к ползучему росту, напоминающие растекающиеся капли конденсата. При уменьшении влажности питательных сред в ходе хранения на плотных средах вырастают колонии второго типа: более плотные, выпуклые, полупрозрачные, негемолитическне, диаметром 1-2 мм, тяжело отличимые от колоний, контаминирующей микрофлоры. При наличии достаточного количества чистой культуры возбудителя готовят мазки и окрашивают их по Граму, определяют подвижность микроорганизмов способом раздавленной капли, ставят тесты на каталазу, оксидазу, гидролиз гиппурата натрия и определяют чувствительность к налидиксовой кислоте. При наличии маленького количества колоний кампилобактеров изолированную колонию с характерными культуральными особенностями пересевают для накопления на плотную питательную среду и выращивают в микроаэрофильных условиях в течение 48 ч.
Этап
По окончании получения чистой культуры возбудителя ставят вышеуказанные тесты и создают окончательную идентификацию выделенных микроорганизмов
Антигенная структура кампилобактеров сложная, в особенности состав термолабильных Аг. Наиболее значимые поверхностные Аг представлены липополисахаридами (О-Аг) и кислоторатворимыми протеиновыми фракциями, играющими ведущую роль в серотипировании. Неспециализированный Аг энтеробактерий отсутствует. Идентифицирован жгутиковый Н-Аг. В ответ на эти Аг кампилобактеров антитела появляются в крови в ранние сроки (на 5-е сут. заболевания титр антител достигает 1:5000) и сохраняются в ней долгое время по окончании заболевания.
Серологический способ изучения играется очень ключевую роль особенно при крупномасштабных эпидемиологических изучениях. В диагностике же отдельных случаев заболевания его роль мала. РА ставится с аутоштаммами либо живой музейной культурой, более четкие результаты приобретают с формалинизированной культурой. Значимый титр в РА — 1:8—1:32 появляется на 2ой семь дней. РСК видоспецифична, она требует применения особого видового антигена. самые чувствительными являются РИФ и ИФМ, эти совокупности созданы за границей, а в РФ-экспериментальные партии для РНГА.
